5．结果
脂肪酸及其坏死物蓝黑色
本章主要介绍病理学中经常涉及的碳水化合物及其分布，以及各种碳水化合物的常用染色方法。
黏液卡红染色法常用来显示酸性黏液，但常出现非特异染色。此外结缔组织黏液染色不如上皮黏液染色恒定。
淀粉酶、唾液酸酶（神经氨酸酶？雪及牛睾丸透明质酸酶能分别消除糖原、盐酸及透明质酸的染色。透明质酸酶同样亦消除硫酸软骨素A及C的染色。果胶酶能从组织切片中去除除糖原外所有的PAS阳性物质。软骨素酶ABC能去除组织切片中的硫酸软骨素A、C及硫酸皮质素B。软骨素酶对透明质酸无影响。链球菌及肺炎球菌透明质酸酶能消除对透明质酸的染色，但对硫酸软骨素的染色无影响。
一、过碘酸雪夫氏反应（PAS）
1．固定10％中性缓冲福尔马林。
2．切片石蜡，6微米。
3．试剂
0．5％过碘酸溶液
过碘酸0．5克
蒸馏水100毫升
1摩尔盐酸溶液
盐酸（比重1．19）83．5毫升
蒸馏水916．5毫升
Coleman氏雪失试剂
碱性品红1克
蒸馏水（加热至60℃）200毫升
加热至沸点，冷却后加入
偏亚硫酸氢钾2克
1摩尔盐酸10毫升
让其漂白24小时后加入
活性炭5克
振摇1分钟，然后用粗滤纸过滤。重复过滤至溶液无色。贮于冰箱中。
4．步骤
（1）脱蜡至水；
（2）过碘酸溶液氧化5分钟；
（3）蒸馏水中漂洗；
（4）Coleman氏雪夫试剂15分钟；
（5）温水冲洗10分钟；
（6）Mayer氏苏木素溶液复染15分钟或Harris氏苏木素溶液复染6分钟；
（7）自来水洗15分钟；
（8）95％酒精、纯酒精及二甲苯脱水透明，每步2次，每次2分钟；
（9）树脂封固。
5．结果
糖原、黏液和某些基底膜 红到紫色
真菌红到紫色
核蓝色
【附】淀粉酶消化法
磷酸缓冲液，pH值为6．0
氰化钠8克
磷酸氢二钠0．28克
磷酸二氢钠1．97克
蒸馏水100毫升
淀粉酶消化溶液
麦芽淀粉酶0．1克
磷酸缓冲液，pH值为6．0 100毫升
按如下步骤进行：
（1）脱蜡至蒸馏水；
（2）在预热至37℃的淀粉酶消化液中处理1小时；
（3）自来水流水充分冲洗或用蒸馏水洗数次；
（4）再进行糖原染色（如PAS）。消化后，糖原染色应为阴性。
二、Mayer氏黏液卡红染色法
1．固定10％中性缓冲福尔马林。
2．切片石蜡，6微米。
3．试剂
Southgate氏黏液卡红贮存液
卡红（朋脂红）1克
氢氧化铝1克
50％酒精100毫升
于500毫升烧瓶中混合，充分振荡。
注意：每次加入少量，振荡，再加入无水氯化铝0．5克。将水浴加热到沸点，置烧杯于沸水中，使其内溶液快速煮沸2～3分钟。流水冲洗使其快速冷却。冷却后过滤，并标上“贮存”字样，该贮存液可保持稳定数月。
Southgate氏黏液卡红工作液
Southgate氏黏液卡红贮存液 10毫升
蒸馏水 90毫升
铁苏木素（Welgert氏）工作液（见第15章）
0．25％间胺黄溶液（见第15章）
4．步骤
（1）脱蜡至水；
（2）Welgert氏铁苏木素工作液染7分钟；
（3）自来水漂洗片刻，然后在稀释的酸酒精溶液中漂洗以清洁背景；
（4）流水洗10分钟；
（5）Southgnte氏黏液卡红工作液染30分钟。弃掉该溶液；
（6）蒸馏水中快速漂洗；
（7）间胺黄溶液复染1分钟；
（8）95％酒精、纯酒精及二甲苯脱水透明，每步2次，每次2分钟；
（9）树脂封固。
5．结果
黏液暗玫瑰色
隐球菌荚膜暗玫瑰色
核黑色
背景黄色
三、阿辛蓝，pH2．5
1．固定10％中性缓冲福尔马林。
2．切片石蜡，6微米。
3．试剂
3％醋酸溶液
1％阿辛蓝SGX溶液，pH值为2．5
核固红溶液
4．步骤
（1）脱蜡至蒸馏水；
（2）3％醋酸溶液3分钟；
（3）阿辛蓝溶液染30分钟；
（4）流水冲洗10分钟；
（5）蒸馏水漂洗；
（6）用过滤的核固红溶液复染5分钟；
（7）流水冲洗1分钟；
（8）95％酒精、纯酒精及二甲苯脱水透明，每步2次，每次2分钟；
（9）树脂封固。
5．结果
弱酸性硫酸化黏液透明
质酸及唾液酸黏液深蓝色
核红到粉红色
胞浆淡红色
四、阿辛蓝，pH1．0
1．固定10％中性缓冲福尔马林。
2．切片石蜡，6微米。
3．试剂
1摩尔盐酸溶液 （见第15章）
0．1摩尔盐酸溶液
1摩尔盐酸 10毫升
蒸馏水 90毫升
阿辛蓝8GX溶液，pH 1．0
阿辛蓝，8GX1克
1摩尔盐酸 100毫升
4．步骤
（1）脱蜡至蒸馏水；
（2）阿辛蓝溶液染30分钟；
（3）不用水洗即用吸水纸将切片吸干；
（4）95％酒精、纯酒精及二甲苯脱水透明，每步2次，每次2分钟；
（5）树脂封固。
5．结果
硫酸化黏液深蓝色
五、阿辛蓝，pH0．4
1．固定10％中性缓冲福尔马林。
2．切片石蜡，6微米。
3．试剂
磷酸盐—盐酸溶液
浓盐酸42毫升
磷酸二氰钠13．8克
蒸馏水958毫升
阿辛蓝溶液，pH0．4
阿辛蓝，8GX 2．5克
磷酸盐—盐酸溶液250毫升
核固红溶液（见第15章）
4．步骤
（1）脱蜡至蒸馏水；
（2） 磷酸盐—盐酸溶液3分钟；
（3）阿辛蓝溶液染30分钟；
（4）流水冲洗10分钟；
（5）蒸馏水中漂洗；
（6）核固红溶液复染5分钟；
（7）流水冲洗1分钟；
（8）95％酒精、纯酒精及二甲苯脱水透明，每步2次，每次2分钟；
（9）树脂封固。
5．结果
强酸性硫酸化黏液蓝色
核粉红到红色
胞浆淡粉红色
【附】透明质酸酶消化法
磷酸盐缓冲液
氯化钠 8克
磷酸二氢钠 2克
磷酸氢二钠 0．3克
蒸馏水 1000毫升
透明质酸酶消化液
牛睾丸透明质酸酶 0．05克
缓冲液 100毫升
按如下步骤进行：
（1）两张连续切片脱蜡至蒸馏水；
（2）一张切片在透明质酸酶消化液中37℃孵育1小时，另一张在磷酸缓冲液中37℃孵育1小时；
（3）两张切片均用流水冲洗5分钟；
（4）根据需要染色。
透明质酸、4－硫酸软骨素或6－硫酸软骨素能被透明质酸酶消化。
六、阿辛蓝－PAS，pH2．5或1．0
1．固定10％中性缓冲福尔马林。
2．切片石蜡，4～6微米。
3．试剂
阿辛蓝8GX溶液？熏pH2．5或1．0（见前述）
1％过碘酸溶液
过碘酸1克
蒸馏水100毫升
Coleman氏雪夫试剂（见前述）
4．步骤
（1）切片脱蜡至蒸馏水；
（2）阿辛蓝8GX，pH2．5染色切片用自来水冲洗；
（3）阿辛蓝8GX，pH1．0染色切片用滤纸吸干；
（4）置于过碘酸溶液中10分钟；
（5）自来水洗5分钟；
（6）Coleman氏雪夫试剂溶液中10分钟；
（7）温水冲洗10分钟；
（8）95％酒精、纯酒精及二甲苯脱水透明，每步2次，每次2分钟；
（9）树脂封固。
5．结果
AB（pH2．5）－PAS：透明质酸及唾液酸黏液蓝色
AB（pH1．0）－PAS：硫酸软骨素蓝色
多糖及中性黏液（含六碳糖及邻－l，2－乙二醇脱氧六碳糖）暗紫红色至红色
【附】唾液酸酶消化法
缓冲液A
醋酸钠26．2克
氯化钙8．9克
蒸馏水200毫升
缓冲液B
醋酸钠26克
氯化钙0．8克
蒸馏水200毫升
唾液酸酶（神经氨酸酶）消化液
唾液酸酶（神经氨酸酶）1毫升
缓冲液A0．1毫升
按如下步骤进行：
（1）切片两张，脱蜡至蒸馏水；一张消化，另一张不消化；
（2）用钻石笔将两张切片上的组织片圈起；
（3）切片空气干燥至少2小时；
（4）将切片放在有盖盒内的玻棒上；
（5）需酶消化的切片？熏用唾液酸酶消化液覆盖，不需酶消化的切片？熏用缓冲液B覆盖；
（6）盖上盘盖，两张切片均在室温下孵育3小时；
（7）蒸馏水漂洗；
（8）然后进行所需的黏液多糖染色。
（唾液酸黏液被消化，变为阴性。）
注意事项：
（1）做第3步后最好将切片过夜放置，次日晨开始第4步。
