一、目的要求
1.掌握常用接种工具的使用。
2.掌握斜面培养基接种法。
3.熟悉半固体和液体培养基接种法。
二、技能目标
1.会使用各种接种工具。
2.会用各种方法进行细菌的接种。
三、基本原理
将一种微生物移到另一种灭菌的培养基上称为接种。要想让微生物在培养基上按要求生长，必须使用适当的接种工具，掌握一定的接种技术。
一般酒精灯火焰周围10cm处是无菌的，无菌超净台吹出的风是无菌的。用接种环或接种针在酒精灯火焰旁或在无菌超净台上，将微生物从某一固体培养基表面或液体培养基中移到另一含有适宜营养成分的固体培养基表面或液体培养基中，经培养就能得到纯培养的微生物。细菌的接种方法有：肉汤琼脂平板接种法、肉汤琼脂斜面培养基接种法、液体培养基接种法、肉汤琼脂半固体培养基接种法。
四、试剂和器材
1.菌种：大肠杆菌、枯草杆菌、金黄色葡萄球菌。
2.肉汤半固体培养基试管、肉汤固体斜面、肉汤液体培养基、肉汤固体培养基平板。
3.接种环、接种针、接种钩、镊子、酒精灯、火柴、酒精棉、试管架、标签纸、恒温培养箱等。
五、操作方法
（一）接种前的准备工作
1.配制培养基：配制肉汤培养基、肉汤琼脂斜面培养基、肉汤琼脂半固体培养基。
2.接种的操作需要在无菌室或超净工作台内进行。无菌室、超净工作台使用前后需要进行消毒。
3.贴好接种标签：在欲要接种的空白培养基试管、斜面或平板上，贴好标签，标记上欲接种的菌名、接种日期等。
4.将培养基、接种工具和其他用品全部放在操作台上摆好，接种前用酒精棉球将双手消毒。
（二）接种方法
接种环或接种针是用铂丝或细电炉丝做成的，使用前后一定要有酒精灯火焰严格灭菌。
1.斜面培养基接种
将菌种试管和待接种的斜面试管，用大拇指和食指、中指、无名指握在左手中，并将中指夹在两试管之间，使斜面向上，成水平状态。在火焰边用右手松动试管塞，以利于接种时拔出。
右手拿接种环通过火焰烧灼灭菌，在火焰边用右手的手掌边缘和小指，小指和无名指分别夹持菌种试管和待接种试管的棉塞（或试管帽），将其取出，并迅速烧灼管口。
将灭菌的接种环伸入菌种试管内，先将环接触试管内壁或未长菌的培养基，达到冷却的目的，然后再挑取少许菌苔。将接种环退出菌种试管，迅速伸入待接种的斜面试管，用环在斜面上自试管底部向上端轻轻地划直线，勿将培养基划破，也不要使环接触管壁或管口。
接种环退出斜面试管，再用火焰烧管口，并在火焰边将试管塞塞上。将接种环逐渐接近火焰，再烧灼。如果接种环上沾的菌体较多时，应先将环在火焰边烤干，然后烧灼，以免未烧死的菌种飞溅出污染环境，接种病原菌时更要注意此点。
2.液体培养基接种
向牛肉膏蛋白胨液体培养基中接种少量菌体时，其操作步骤基本与斜面接种时相同，不同之处是挑取菌体的接种环放入液体培养基后，应在液体表面处的管内壁上轻轻摩擦，使菌体从环上脱落，混进液体培养基，塞好试管塞后，摇动液体，使菌体在液体中分布均匀，或用试管振荡器混匀。
向液体培养基中接种量大或要求定量接种时，可将无菌水或液体培养基注入菌种试管，用接种环将菌苔刮下，再将菌种悬液以无菌吸管定量吸出加入，或直接倒入液体培养基。如果菌种为液体培养物，则可用无菌吸管定量吸出加入或直接倒入液体培养基。整个接种过程都要求无菌操作。
3.穿刺接种用接种针挑取菌种（针必须挺直），自培养基的中心垂直地刺入半固体培养基中，直至接近管底，但不要穿透，然后沿原穿刺线将针拔出，接种针不能在培养基中左右移动。塞上试管塞，烧灼接种针。
将以上接种的培养基在适宜的条件下培养一定时间，进行观察。
六、提醒与技巧
1.接种环或接种针在接种前后都要严格消毒。
2.接种环或接种针消毒后在蘸取菌种之前，一定要在试管内壁上靠一靠，使铂丝的温度冷却一下，避免烫伤菌种。
附：细菌的接种及无菌操作技术实训报告
实训名称：细菌的接种及无菌操作技术
姓名学号
专业班级
实训地点实训日期
一、实训目的
二、实训原理
三、实训材料
四、实训步骤
五、实训结果及分析
1.将实验结果填于下表。
接种情况记录表
2.总结无菌接种操作技术操作要点及注意事项。
菌名培养基名称接种方法生长情况有无污染
六、问题与思考
1.为什么从事微生物实验工作的最基本要求是无菌操作？
2.为什么接种环接种前后都要消毒？
