（1）配制。选择优质马铃薯，去皮，挖去发芽眼，削去青皮 ，切成薄片，称取200克，置于钢精锅或铝锅，加水1000毫升 ，煮沸后小火保持30分，用4层纱布过滤，取其汁液。若滤液 不足1000毫升，加水补足，然后加入琼脂继续加热，待琼脂 完全溶化后，再加入葡萄糖，补水至1000毫升，用玻璃棒搅 拌均匀，趁热分装试管或三角瓶备用。
（2）分装试管。将配置好的PDA培养基，趁热倒入事先准备 好的分装器或漏斗、量杯，分装试管。每支试管装培养基为 管长的1/5~1/4，培养基液不可黏附管口内壁，如有黏附物质 必须揩拭干净，以防杂菌感染。
图5分装试管
（3）塞棉塞。棉塞要紧贴管壁，松紧度以用手指提起棉塞而 不脱掉为宜，光圆不起皱，插入管口的长度为棉塞总长的2/3 ，然后将塞好棉塞的试管绑扎成捆，管口棉塞处用牛皮纸包 扎好，以防灭菌时棉塞受潮，引起杂菌感染。
图6塞棉塞
1.正确2.错误
（4）灭菌。将包扎成捆的试管放入手提式高压灭菌锅里，在 0.15兆帕压力下灭菌30分钟。使用手提式高压锅时必须按要 求进行操作，特别要注意加水和熄火两个技术环节，以防烧 锅、水浸试管和试管破裂、充塞等人为事故。
（5）排成斜面。将取出的试管冷却到50℃～60℃后，放到用 木架或木条摆成一定角度的斜面上，使之凝成斜面，倾斜度 以斜面达到管长的1/2为度。待完全凝固后，即成试管斜面培 养基，供分离、培养母种用。
图7培养基斜面搁置方法
1.正确2.斜面过小3.斜面过大
（6）检验。随机抽取3~5支试管，置于25℃～30℃下培养3天 左右进行培管查杂。若所查试管培养基表面或内部均无任何 变化，则表明灭菌效果良好，可供接种培菌用；若个别试管 的斜面上有杂菌菌落，说明灭菌不彻底，要重新灭菌。这种 检验不是每次灭菌时都要进行，一般在新购灭菌锅灭菌时或 中途长时间未用和随机抽验时才进行这种检验。
