所谓无菌操作，是指接种操作的空间、使用的器皿和工具、 操作者的衣着和手，不能沾染任何活的微生物，以保证接种 材料不沾染杂菌的整个接种操作过程，也是灰树花菌种分离 、转扩中的重要技术环节之一。其具体操作如下：
（1）接种前必须使待接种物冷却到适宜温度（28℃～30℃） ，防止高温接种热死菌种。同时要对接种箱（室）进行清洁 消毒，并准备好接种用具。
（2）将已灭菌冷却过的待接种物（试管、瓶、袋）及各种需 用物品提前搬入接种箱（室）内，用药物熏蒸，有条件的可 用紫外线灯灭菌20～30分钟或用环境消毒器灭菌30分钟，效 果会更好。
（3）接种人员在操作前穿上无菌工作服、工作鞋，戴好口罩 和工作帽，若没有的也可以换一套清洁的衣服。再用新洁而 灭溶液或金星消毒液清洗菌种容器表面及棉塞，同时用液洗 手，然后带菌种或分离物进入接种室（箱）。
（4）接种操作前，用70％酒精棉球擦手、菌种容器表面、工 作台面及接种工具，再点燃酒精灯开始接种操作。操作时， 要思想集中，严格认真，动作要轻，尽量减少空气流动。
（5）接种结束，及时搬出所有物品，收拾干净。若要连续使 用，必须重新进行全面的消毒灭菌。
