一、目的要求
1.观察酵母菌的形态结构及出芽繁殖方式。
2.观察酵母菌的菌落特征。
3.学习区分酵母菌死活细胞的实验方法。
二、技能目标
1.能够通过酵母菌的形态进行酵母菌的初步辨别。
2.学会区分酵母菌的死活细胞。
三、基本原理
酵母菌大小通常比细菌大几倍甚至十几倍，大多数的酵母以出芽方式进行无性繁殖，有的二分裂繁殖。用美蓝制成的水浸片，可观察酵母的形态和出芽繁殖方式以及进行死活细胞的鉴别。美蓝是一种弱氧化剂，它的氧化型蓝色，还原型无色。当用美蓝对酵母细胞进行染色时，由于活细胞的新陈代谢作用旺盛，具有较强的还原能力，能将进入细胞的美蓝还原使细胞无色，故活细胞是无色的。而死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞则被染料染成蓝色，需要注意的是：一个活酵母菌的还原能力是有限的，必须严格控制染料的浓度和染色时间。
四、试剂和器材
1.菌种：啤酒酵母2～3d 培养物。
2.试剂：0.1%吕氏美蓝染液、0.05%吕氏美蓝染液、碘液。
3.器材：显微镜、载玻片、盖玻片、接种针、酒精灯。
五、操作步骤
（一）酵母菌菌落形态观察并记录
（二）美蓝浸片的观察
1.在干净载玻片中央加1滴0.1%吕氏碱性美蓝染色液，以无菌操作用接种环挑取少量酵母菌体放于染液中，混合均匀。
2.取一块盖玻片，先将一边与菌液接触，然后慢慢将盖玻片放下（以免产生气泡），使其盖在菌液上，将多余菌液用吸水纸吸干。
3.将制片放置3min 后镜检，先用低倍镜，然后用高倍镜观察酵母的形态和出芽情况，并根据颜色来区别死活细胞。
4.染色约0.5h 后再进行观察，注意细胞数量是否增加。
5.用0.05%吕氏碱性美蓝染色液重复以上操作。
（三）水-碘液浸片的观察
在载玻片中央加1滴革兰氏染色用碘液，再加2滴水，取少量酵母菌放在水-碘液中混匀，盖上盖玻片，镜鉴。
六、提醒与技巧
1.滴加染液时不宜过多或过少，否则在盖上盖玻片时，菌液会溢出或出现大量气泡而影响观察。
2.盖玻片不宜平着放下，否则易产生气泡。
附：酵母菌形态及菌落特征观察技术实训报告
实训名称：酵母菌形态及菌落特征观察技术
姓名学号
专业班级
实训地点实训日期
一、实训目的
二、实训原理
三、实训材料
四、实训步骤
五、实训结果及分析
绘图说明所观察到的酵母形态特征。
啤酒酵母菌
形状：
排列：
染色性：
六、问题与思考
1.在显微镜下，酵母菌有哪些突出的特征区别于一般细菌？
2.美蓝染色液浓度和作用时间的不同，对酵母菌细胞数量有何影响？
