一、目的要求
1.掌握非灭菌药物的微生物总数测定方法。
2.掌握药品微生物学检验基本要求。
二、技能目标
能够按国家标准进行微生物限度检查。
三、试剂和器材
无菌瓶、固体培养基、酒精灯、培养箱、超净工作台、恒温水浴锅、放大镜、冰箱、试管、移液管等。
四、操作步骤
1.检样
取一定量的银翘解毒片研细，制成1∶10的供试液，备用。
2.细菌总数的测定
（1）稀释检样：稀释度分别为10-2、10-3、10-4，稀释倍数依检样而定，以培养后平板的菌落数在30～300之间的稀释度最为合适。
（2）从最后3个稀释度的试管中各取1mL稀释水加入空的灭菌培养皿中，每一稀释度做两个培养皿。
（3）各倾倒15mL已溶化并冷却到50℃左右的营养琼脂培养基，立即放在桌上摇匀。
（4）待培养基凝固后倒置于36±1℃温箱中培养48±2h，然后取出计数。
（5）同时将营养琼脂培养基倒入加有1mL稀释液的灭菌培养皿作空白对照。
3.菌落计数方法
做平板菌落计数时，可用肉眼观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏。在记下各平板的菌落数后，求出同稀释度的各平板平均菌落总数。
4.菌落计数的报告
（1）平板菌落数的报告选取菌落数在30～300之间的平板数作为菌落总数测定标准。平皿内如有链状菌落生长时（菌落之间无明显界线），可视为一个菌落，如果有不同来源的几条链，则应将每条链作为一个菌落计。
（2）稀释度的选择应选择平均菌落数在30～300之间的稀释度，乘以稀释倍数作报告。
（3）菌落数的报告菌落数在100以内时，按其实有数报告，大于100时，采用两位有效数字，在两位有效数字后面的数值，按四舍五入计算。为了简便，常用10的指数来表示。
附：银翘解毒片的微生物限度检查实训报告
实训名称：银翘解毒片的微生物限度检查
姓名学号
专业班级
实训地点实训日期
一、实训目的
二、实训原理
三、实训材料
四、实训步骤五、实训结果及分析
1.结果记录。
2.计算。
3.报告。
六、问题与思考
1.要使平板菌落计数准确，需要掌握哪几个关键？为什么？
2.当你的平板上长出的菌落不是均匀分散的，为什么要培养较长时间（48h） 后观察结果？
